### 感染预实验概述

本实验利用24孔培养板，进行目标细胞与工具细胞的感染预实验。所选工具细胞可包括293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）等。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒及废液缸等。依据目标细胞特点，选择性添加Polybrene可提高感染效率。

### Day 1：准备细胞

首先，将细胞培养至对数生长期，使用胰酶消化并计数。通过细胞计数确定细胞密度，每孔接种5×10⁴个细胞，并加入500µL的细胞培养液。一般情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度。接种目标细胞时，请根据其实际生长速度调整接种量，以确保感染3天后的融合度适宜。

### Day 2：慢病毒颗粒准备与感染

（1）准备慢病毒颗粒：计算所需的慢病毒颗粒量，从-80℃取出冻存的慢病毒颗粒，进行冰浴融化；

（2）感染目标细胞：取出培养箱中的细胞，观察其生长状态与融合度。如细胞状态良好，则可开始实验：

A. 小心移去24孔板中的旧培养液，加入新的完全培养液；

B. 按照计算结果，将慢病毒颗粒液加入细胞中，并将培养板平放以“8”字形轻柔混匀；

C. 混匀后，将细胞培养板放置于37℃、5% CO₂培养箱中，过夜培养。

### Day 3：培养液更换

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，替换为含有5%灭活FBS（胎牛血清）的新培养液，继续培养。注意，目标细胞的感染时长需调节，某些细胞不适宜感染超过12小时。

### Day 4：细胞状态观察

继续培养细胞，观察其状态是否有异常。

### Day 5：感染效率评估

评估慢病毒颗粒的感染效率：用70%乙醇清洗培养板外壁，使用倒置荧光显微镜观察细胞荧光并记录照片，以估算慢病毒颗粒对细胞的感染效率。如果慢病毒载体的基因表达所需时间较长，建议在感染72至96小时后观察荧光表达。通过荧光结果，可以初步评估并确定目标细胞的MOI值。

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