在最近的一项研究中，来自第三军医大学西南医院的唐康来、郭林、陈玉佳，第三军医大学的缪洪明，及纽约大学的刘传聚共同发表了论文《Malate initiates a proton-sensing pathway essential for pH regulation of inflammation》，论文刊登在《Signal Transduction and Targeted Therapy》（影响因子：408）上。他们的研究证明了TCA循环中的中间体L-苹果酸（Malate）通过直接结合结合免疫球蛋白（BiP），抑制BiP与干扰素调节因子2结合蛋白2（IRF2BP2）的相互作用，从而在体外和体内抑制炎症反应。

研究显示，pH值的降低促进了L-苹果酸羧基的质子化，增强了L-苹果酸与BiP的结合，并以羧基依赖的方式抑制了BiP与IRF2BP2的相互作用。在巨噬细胞中，BiP-IRF2BP2信号通路对pH值变化敏感，可以介导抗酸化炎症反应以及由细胞内pH碱化剂诱导的促炎作用。此外，局部碱化可通过骨髓BiP依赖的机制诱导小鼠结肠炎，并降低IRF2BP2的蛋白水平。

研究中，作者利用汉恒生物提供的HBLV-U6-gRNA-EF1-CAS9-PURO慢病毒载体，对Raw2647细胞进行Hspa5和Mdh2基因敲除，以构建Hspa5+/-和Mdh2-/-细胞系。

1. L-苹果酸在体内外的抗炎作用

首先，在以脂多糖（LPS）刺激的骨髓衍生巨噬细胞（BMDM）模型中，筛选了38种可溶解能量代谢中间体，研究发现L-苹果酸显示出最显著的抗炎作用。通过ELISA和Western blot验证了L-苹果酸对IL-6和TNF-α的抑制作用，并显示其能够抑制IL-1β前体的表达。此外，L-苹果酸在小鼠急性炎症模型中显著提高小鼠存活率，并减轻了胶原抗体诱导的关节炎模型中的疾病严重程度。

2. L-苹果酸与BiP直接结合以实现抗炎作用

许多研究表明，糖酵解是LPS诱导IL1b表达的必要条件。然而，结果显示L-苹果酸不影响糖酵解，这意味着其抑制炎症反应的机制与代谢无关。通过药物亲和反应靶向稳定性（DARTS）实验，发现L-苹果酸诱导抗炎作用的潜在分子基础为BiP。SPR检测进一步确认L-苹果酸与重组BiP蛋白直接相互作用。

3. L-苹果酸抑制BiP-IRF2BP2的直接相互作用

为了探讨L-苹果酸如何影响BiP与配体的结合，研究发现IRF2BP2是与BiP结合能力最强的配体。L-苹果酸处理的BMDM模型中，RNA测序分析显示L-苹果酸干预下，特定转录因子的表达发生变化，这表明IRF2BP2与抗炎作用之间存在潜在联系。同时，L-苹果酸可阻断BiP与IRF2BP2的结合，但与IRF2BP2本身无直接结合。

4. L-苹果酸-BiP轴通过靶向IRF2BP2调节炎症反应

研究发现，L-苹果酸处理后，IRF2BP2蛋白水平以BiP依赖的方式增加，而其mRNA水平并未受到影响。BiP诱导剂可显著降低LPS刺激后IRF2BP2蛋白丰度。研究结果显示，IRF2BP2缺失将阻断L-苹果酸的抗炎作用并降低小鼠的存活率，说明L-苹果酸-BiP轴在炎症反应调控中发挥重要作用。

5. L-苹果酸可保护IRF2BP2免受BiP驱动的蛋白质降解

进一步的实验表明，L-苹果酸可以保护IRF2BP2免受BiP诱导的降解影响。研究表明，IRF2BP2的稳定性受到BiP诱导剂的破坏，但L-苹果酸能恢复其稳定性。这一发现指出了L-苹果酸的抗炎机制，涉及BiP与IRF2BP2相互作用的调控。

6. pH值变化对BiP-IRF2BP2信号传导的影响

研究表明，细胞内pH值的变化影响IL-1β的产生，并且通过调节BiP-IRF2BP2信号通路，酸化与碱化剂均会影响IL-1β的水平，且BiP与IRF2BP2的缺失则会阻断这些效果。这表明BiP-IRF2BP2信号通路在维持细胞环境的酸碱平衡与免疫反应中具有重要作用。

总结而言，此研究阐明了ag尊龙凯时在L-苹果酸作为pH感应分子方面的重要角色。L-苹果酸通过BiP-IRF2BP2信号通路调控炎症反应，为代谢与免疫系统的相互作用提供了新的视角，并可能为炎症相关疾病的治疗提供新的靶点和策略。